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关于色谱柱、色谱填料、国产替代等常见问题的解答你都知道吗?(一)

浏览次数: 日期:2019-07-22 15:39:02

       目前纳微的色谱填料和色谱柱种类越来越多,合作伙伴也越来越多,所以对纳微的产品和技术的咨询也日益增多,今天小编将一些大家经常咨询的问题和解答提供如下,便于大家的理解和更好地在以后的工作中使用。

 

 

Q1: 硅胶填料的机械强度如何以及不同粒径的硅胶填料的操作压力各是多少?
A1: 高机械强度是硅胶的特点之一。对于粒径10μm 的硅胶填料我们推荐设定80-100Bar 的压力,对于20-40μm 的硅胶填料我们推荐设定40-70Bar 的压力,来装填动态轴向压缩柱。硅胶填料的机械强度会影响装柱及使用寿命。纳微的硅胶填料拥有卓越的机械强度,通过在DAC柱上反复装填20次,观察纳微UniSil®10-100 C8与进口同类型的色谱填料的柱压力变化(图1),可以看出UniSil®柱压基本稳定,而进口填料的柱压不断升高,显然UniSil®的机械强度优于进口填料。另外通过电镜对其形貌观察发现(图2),进口填料经装柱后出现部分破碎的情况(图2右),UniSil®填料基本无变化(图2左)。

 

 

Q2:填料中孔径的概念?
A2:我们通常所说的孔径实际上是个统计的、平均的概念,即平均孔径,它是指累积孔径分布曲线50%处的平均孔径,或是与孔径分布曲线的最高频度相对应的平均孔径。通过测试纳微UnSil5-1000与进口同类型的色谱填料的孔径分布,得出孔径分布曲线(图3),可以看出UnSil的孔径分布较窄,而进口填料的孔径分布较宽,因而UnSil的硅胶填料孔径的控制更加精准。

 

 

       以下是纳微科技不同孔径的微球在扫描电镜下的图片(图4)。纳微可以定制最大4000Å孔径的微球。

 

 

Q3:为什么要做封端处理?
A3:一般常见的硅胶填料(没有经过封端处理),pH耐受性都在2-8之间,在碱性环境下,硅胶的Si-O-Si-O结构会被破坏而溶解。即使在pH5-7的环境中,硅胶表面的Si-OH也会电离。使得碱性化合物产生拖尾,严重影响分离效果。封端处理以后可以减少待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应,改善和保持较好的峰形,这对于碱性化合物的分离尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。纳微科技的硅胶填料经过特殊封端处理技术后(如UniSil Ultra系列产品),使得填料的pH耐受性有所提高(pH 2-10),并且覆盖硅胶金属杂质还可以减少碱性化合物的拖尾,增强峰型对称性。

通过在同等条件下,对UniSil Ultra与同类型的进口硅胶填料进行碱(pH10.0)冲洗,可以看出UniSil Ultra比同类型的进口D硅胶填料可以耐受更多次数和更长时间的强碱清洗(图5),从而证明UnSil Ultra的的耐碱性更强,使用寿命更长。

碱洗条件:MeOH/TEA (pH=10.0)=40:60
冲洗体积:60CV
柱效测试:
流动相:ACN/H2O=60:40
柱温:35℃
样品:甲苯

 

 

Q4:C18柱选用的基本原则?
A4:(1)选用经封端处理的色谱柱,可以防止碱性化合物的拖尾现象。
(2)选用含碳量高的柱子,可以增加保留值。(还要综合考虑孔道结构和空间)
(3)选用小颗粒的填料,可以提高分离度。(还要综合考虑压力和设备投入)
(4)分子量大的组分选用大孔径填料的柱子。
(5)纳微可以根据不同的样品条件提供不同规格的C18填料,例如常规的UniSil®C18, 耐碱性较强的UniSil® C18 Ultra,以及适用于100%水溶液的UniSil® C18 Polar等。

 

Q5:测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽,应该怎么选择柱子?
A5: 多肽一般还是可以用C18的,根据分子量不同可以选择150Å、300Å的孔径,有些小肽用100Å也可以。在C18上保留太强时,C8,苯基,C4,C3也都可以用于多肽的分离。三肽也可以尝试100Å C18,不过小肽往往极性偏大,普通C18上可能没有保留,这时需要使用亲水型C18或Hilic模式。
以下是为大家推荐的纳谱ChromCore的色谱分析柱产品:
(1)分子量较大的多肽(2000D以上)可以优先考虑纳谱ChromCore C18,ChromCore 300 C18。
(2)小肽可以用ChromCore 120 C18,如果无保留,选择亲水型C18或Hilic模式。
(3) C8系列有ChromCore 120 C8、ChromCore C8、ChromCore 300 C8、ChromCore AQ C8(亲水型)。
(4) 苯基系列有ChromCore Phenyl、ChromCore PFP、ChromCore Biphenyl。
(5) C4系列有ChromCore C4、ChromCore 300 C4、ChromCore 300 C4-T。
(6) 亲水型C18可选ChromCore AR C18、ChromCore AQ C18、ChromCore Polar C18。
(7) Hilic模式可选ChromCore HILIC-Amide、ChromCore HILIC-Imidazole、ChromCore Diol、ChromCore CN等。

 

Q6:我之前有了解到贵公司也有手性色谱柱,之前买过国外品牌的手性柱,其手性柱价格相比普通反相色谱柱,要高出很多倍,不知道是本身柱子装填技术的难度大还是其他什么原因?它的主要技术关键在什么方面?
A6:这个问题我们请纳微科技专门负责手性产品的朱总解答
(1)手性柱使用的填料介质是大孔多孔介质,生产工艺复杂;(2)在介质上涂敷或键合的手性位点官能团生产工艺复杂;(3)官能团与介质基球涂敷或键合工艺难度大,且工艺复杂;(4)装柱工艺及成本也较高。这些都导致了手性色谱柱比普通反相柱价格高出很多。纳微科技手性填料包括OD、OJ、OZ、AS、AJ 5个型号的产品,手性色谱柱从填料的生产(包括直链淀粉产品研发)到装柱一系列过程都是自己完成,所以和国外相比,性价比更高,另纳微还可以提供手性拆分纯化服务。

 

Q7:色谱柱的技术都有哪些?国内外的色谱柱都有何差别?
A7:色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料是色谱柱的心脏,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,需要经验积累。纳微有专门提供装柱培训的课程。有兴趣的朋友可以联系我们。
很多人都认为国内和国外的色谱柱差距很大:原因在于国内的的公司都不会自己开发填料,一般都会买国外现成的填料装柱,填料质量控制权不在自己手里。另外,对色谱柱性能很关键的基础材料——裸硅胶,国产的还不过关,在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比,差距很大。

 

正解来了:

事实上这种观点已经过时了,纳微科技经过长达十余年的潜心研发,目前已拥有单分散硅胶色谱填料的精准制备技术、表面功能化技术和规模化生产能力,打破了填料长期依赖进口的局面。目前受中美贸易战的影响,国外的色谱柱和色谱填料不仅价格昂贵,而且供货不稳定,出问题反馈后响应时间长,这些都会给企业造成不小的影响。
在纳微科技,您将不会有以上的困扰。因为纳微具备以下优势:
(1)大规模化生产能力(硅胶填料200kg/批次)
(2)从基球的大规模生产-表面键合和封端-装柱全程在公司内部完成。可以保障整个生产工艺过程可控和可溯源。
(3)快速响应:纳微市场部有免费400电话和QQ在线咨询,您可以随时随地在线咨询任何有关问题。线下在国内各个地区都有销售经理专门和您对接,有任何需求或者问题都可以第一时间做出响应。
详细可以参考纳微科技的董事长江必旺博士接受佰傲谷专访的文章:生物制药耗材和设备的国产化是必然趋势

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